裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)介紹2024年已更新
裸鼠腫瘤模型
無(wú)胸腺裸鼠（Nude Mouse，簡(jiǎn)稱裸鼠）目前已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域中*的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，它是先天性胸腺缺陷的突變小鼠，裸鼠接種成活的腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性與臨床所見(jiàn)十分相近。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位，腫瘤不宜生長(zhǎng)過(guò)大，一般不要超過(guò)1000mm3。
裸鼠腫瘤模型實(shí)驗(yàn)步驟
1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中的血清。
3、用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml。
4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成，途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝。
5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部。
6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率。
7、接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。
9、接種后一周左右可以見(jiàn)到皮下開始出現(xiàn)腫塊。
10、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過(guò)大，一般不要超過(guò)1000mm3 ，腫瘤負(fù)荷過(guò)大常常會(huì)以違背動(dòng)物倫理而被雜志社刁難(因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題悲慘地被plos one拒過(guò)稿）。
11、腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長(zhǎng)軸，b為短軸)。
12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等
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