試劑盒應(yīng)用

本試劑盒主要用于細(xì)菌16S rDNA 的快速檢測(cè)，無(wú)需經(jīng)過(guò)繁瑣的基因組DNA 提取純化，取樣后直接

PCR 擴(kuò)增即可獲得16S rDNA 信息，通過(guò)比對(duì)16S 片段序列，最終獲得細(xì)菌種屬信息。

本試劑盒可以檢測(cè)量低至104 個(gè)/mL 個(gè)細(xì)菌，對(duì)難培養(yǎng)、珍貴樣本、表型不能鑒定的未知細(xì)菌快速擴(kuò)

增尤為方便。使用本試劑盒前無(wú)需提取純化，可直接對(duì)菌斑、甘油菌或?qū)?shù)生長(zhǎng)期菌進(jìn)行檢測(cè)，從

而大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。試劑盒中提供的16S PCR Premix 已包含有染料，PCR 結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂

糖凝膠電泳，PCR 產(chǎn)物可直接進(jìn)行測(cè)序分析。

本產(chǎn)品僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

保存條件

-20oC 保存。使用時(shí)請(qǐng)置于冰上。

使用方法

1、樣本準(zhǔn)備：

1）菌液：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中。

2）甘油菌：取1μL 菌液加入PCR 反應(yīng)體系中。

3）單菌落：無(wú)菌吸頭或者無(wú)菌牙簽挑取單個(gè)菌落置于500 μL 無(wú)菌生理鹽水中，渦旋混合均勻，取

1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中。

2、推薦PCR 反應(yīng)體系

3、按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

4、瓊脂糖凝膠電泳

使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，不同菌株電泳片段稍微差別，一般為1.5kb 左右。

5、PCR 產(chǎn)物回收和測(cè)序

使用切膠回收試劑盒進(jìn)行回收，并使用以下推薦引物進(jìn)行測(cè)序。將DNA 測(cè)序結(jié)果與NCBI 數(shù)據(jù)

庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，確定細(xì)菌種類(lèi)。

注意事項(xiàng)

1、超凈臺(tái)中操作，應(yīng)佩戴無(wú)菌手套，穿實(shí)驗(yàn)服，操作前用75%乙醇對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行消毒。

2、使用無(wú)菌移液吸頭和離心管，開(kāi)蓋務(wù)必輕柔，減少氣溶膠污染。

3、盡可能使用2 次純化細(xì)菌，以提高測(cè)序有效率。