ZETA LIFE細(xì)胞增殖及毒性檢測-Cell Counting Kit(CCK試劑盒) CellCounting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST (水溶性四唑鹽，化學(xué)名: 2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯基) -5-(2,4-二磺基苯) -2H四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
ZETA LIFE細(xì)胞增殖及毒性檢測-Cell Counting Kit(CCK試劑盒)
價(jià)格：￥615 - 2800
品牌：ZETA LIFE .
貨號(hào)：K009
產(chǎn)地：USA
英文名:cck8
保質(zhì)期:24 months
保存條件:4°C避光保存
規(guī)格:500T-3000T
CellCounting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST (水溶性四唑鹽，化學(xué)名: 2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯基) -5-(2,4-二磺基苯) -2H四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
CCK是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其他MTT類似產(chǎn)品如XTT. MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn):
-CCK被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成的formazan是水溶性,不需要有特定的溶解液來溶解，而WST和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都不是水溶性的，因而可以省去后續(xù)溶解步驟。
-CCK比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。
-CCK和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。
CCK法與其他檢測方法之間的比較：
操作說明:
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測定細(xì)胞具體數(shù) 量時(shí))
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例(例如: 1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成-一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度， 每組3-6個(gè)復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)2- 4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,然后加CCK試劑培養(yǎng)-定時(shí)間后測定OD值， 制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸),
OD值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一
致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時(shí)間)。
二、 細(xì)胞活性檢測
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ul孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在379C, 5% CO2的條件下)。
2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育14小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)
板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值~毒性檢測
1、在96孔板中配置100u的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在379C，5% CO2的條件下)。
2、向培養(yǎng)板加入10ul不同濃度的待測物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如: 6、 12、24或48小時(shí))。
4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
7、如果暫時(shí)不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
注意:如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基)，去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
備往:
①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入
CCK試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。
③白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
④當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1 ,000個(gè)/孔L(100u培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此
推薦接種量不低于2500個(gè)/F孔(100ul培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。
⑤如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450nm濾光片的檢測靈敏度。
⑥培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測造成影響。
動(dòng)計(jì)算:
細(xì)胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]x100
A(加藥):具有細(xì)胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A(0加藥):具有細(xì)胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
保存條件:
49C避光保存，有效期一年。
溫聲提示:不可用于臨床治療。
上海市楊浦區(qū)國康路100號(hào)2層
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